Sono Batteri commensali e Patogeni opportunisti.
Sono i Batteri responsabili alle patologie chiamate:
INTOSSICAZIONE, malattia provocata dall'ingestione di un alimento contaminato da batteri
INFEZIONE, malattia provocata dalla moltiplicazione di batteri all' interno dell'ospite.
Gli stafilococchi più pericolosi sono gli stafilococchi Aureus,.
L'immagine che vedete alla destra è un'immagine di una patologia sul braccio causato da batteri stafilococchi Aureus.
Parliamo adesso di Esperienze Pratiche fatte da noi in laboratorio,, e parliamo di Ricerca degli Stafilococchi Aureus.
Se vogliamo Sapere se a un Campione X sono presenti stafilococchi aureus, dobbiamo iniziare con la fase di ARRICCHIMENTO., questa Fase della ricerca è una fase in cui vengono utilizzati dei terreni di coltura di arricchimento ossiano i terreni che contengono sostanze che favoriscono la crescita di tutti i ceppi batterici che vogliamo esaminare e rallentare la crescita di tutti i batteri che non ci interessano, e in questa fase viene utilizzato il terreno BRODO Giolitti-Cantoni.
Proseguiamo la ricerca con la fase 2, Cioè la fase dell'ISOLAMENTO.In questa fase vengono utilizzati due terreni diversi che si chiamano Agar Sale-Mannitolo e Agar Baird Parker. Questi terreni contengono sostanze che "Selezionano" i batteri che devono crescere e mostrano le differenze sia metaboliche sia morfologiche dei batteri.. La MSA (Mannitol-Salt-Agar) contiene come agente selettivo il Sale NaCl ad Alta concentrazione, Rosso Fenolo come indicatore di pH e Mannitolo e Peptone come Agenti differenziali.
La ABP invece contiene il piruvato di Sodio come agente selettivo, la glicina, LiCl (litio cloruro) e Tellurito di K come agenti selettivi e tuorlo di uovo come agente differenziale.
Procedimento: MSA
-Si semina un batterio a Triplo striscio sul terreno
-incubare x 24 ore a 37 °c
-e osservare
*Gli Stafilococchi Aureus fermentano il mannitolo e produce acidi, quindi l'indicatore rosso fenolo vira al giallo intenso.*Gli altri Stafilococchi non fermentano il mannitolo e quindi utilizzano il peptone da cui si liberano ioni NH4+ (Ione ammonio) che alza pH quindi il colore vira a Fucsia.
Procedimento: ABP
-versare un supplemento di tuorlo d'uovo e tellurito di potassio nella piastra
-e aggiungere l' Agar Base
-seminare a triplostriscio
-incubare x 24ore a 36 °c e osservare
*Tutti gli stafilococchi riducono il tellurito di K
e formano colonie nere
*Gli stafilococchi aureus producono enzimi (proteasi e glipisi) che demoliscono le proteine e i grassi dell'uovo quindi intorno alle colonie si osserva un doppio alone di chiarificazione.
Fase 3. E' la fase chiamata Conferma, cioè viene confermato se è uno stafilococco o no,utilizzando il metodo di Colorazione di gram. Se è Cocco Gram+ , avete davanti a voi uno stafilococco, e viene eseguito anche in questa fase la ricerca di Catalasi.Gli stafilococchi sono catalasi +.
Questa è un'immagine degli stafilococchi vista da un microscopio con l'obbiettivo 100x immersione.
*a proposito, il colorazione di gram è una colorazione per cellule che hanno caratteristiche e morfologie simili ma hanno un metabolismo diverso.
gram + quando il batterio è colorato di Blu
gram - quando il batterio è colorato di rosa.
è una colorazione che consiste nel colorare il parete delle cellule.:D
Ricerca della Catalasi: è un test che consiste nel ricercare l'enzima che demolisce l'acqua ossigenata in acqua. Questo test consiste nel immergere un'ansata di batteri in una goccia di H2O2 ossia l'acqua ossigenata. La comparsa di bollicine indica la positività.
Fase 4. L'identificazione Presuntiva.In questa fase viene indicata a quale specie appartiene il batterio in esame.Si eseguono le prove seguenti:
-Ricerca Coagulasi: si uniscono in una provetta 0,5 mL di brodo coltura con batteri e 0,5mL di plasma di coniglio.è positivo se si forma un coagulo. (S.Aureus = Coagulasi +)
-Ricerca DNAsi: test di ricerca di enzima che demolisce DNA ossia l'acido deossiribonucleico.
Questo test consiste nell' aggiungere un Acido Forte come HCl ossia Acido Cloridrico in un ceppo batterico. Se intorno alle colonie si presenta un doppio alone, vuol dire che il DNA è stato demolito quindi test +. (S.Aureus= DNAsi +)
-Ricerca Termonucleasi:Test di ricerca di un Enzima termoresistente prodotto dallo stafilococco aureus. Quest'enzima idrolizza il DNA e alla sua produzione è associata la produzione di Enterotossine, Tossine che causano intossicazione.
In questo test, viene riscaldato il campione, lo si depone sull'agar contenente Na e un'indicatore di pH. Dopo l'incubazione, Se c'è il viragio di colore il test è +.
->spero che vi sia piaciuta questa piccola Introduzione sulla Ricerca Degli Stafilococchi
Grazie
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